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ATCC菌種變異和被污染如何規(guī)避

更新時(shí)間:2015-07-27      點(diǎn)擊次數(shù):2723
   ATCC菌種保藏的重要意義就在于盡可能保持其原有性狀和活力的穩(wěn)定,確保菌種不死亡、不變異、不被污染,以達(dá)到便于研究、交換和使用等諸方面的需要。ATCC菌種保藏的目的是微生物在使用和傳代過程中容易發(fā)生污染、變異甚至死亡,因而常常造成菌種的衰退,并有可能使優(yōu)良菌種丟失。
  ATCC菌種保藏?zé)o論采用何種保藏方法,首先應(yīng)該挑選典型菌種的優(yōu)良純種來進(jìn)行保藏,保藏它們的休眠體,如分生孢子、芽孢等。其次,應(yīng)根據(jù)微生物生理、生化特點(diǎn),人為地創(chuàng)造環(huán)境條件,使ATCC菌種微生物長期處于代謝不活潑、生長繁殖受抑制的休眠狀態(tài)。這些人工造成的環(huán)境主要是干燥、低溫和缺氧,另外,避光、缺乏營養(yǎng)、添加保護(hù)劑或酸度中和劑也能有效提高保藏效果。
  ATCC菌種保藏的方法多樣化:
  1、斜面低溫保藏法
  將ATCC菌種接種在適宜的斜面培養(yǎng)基上,待菌種生長*后,置于4℃左右的冰箱中保藏,每隔一定時(shí)間(保藏期)再轉(zhuǎn)接至新的斜面培養(yǎng)基上,生長后繼續(xù)保藏,如此連續(xù)不斷。此法廣泛適用于細(xì)菌、放線菌、酵母菌和霉菌等大多數(shù)微生物菌種的短期保藏及不宜用冷凍干燥保藏的ATCC菌種。放線菌、霉菌和有芽孢的細(xì)菌一般可保存6個(gè)月左右,無芽孢的細(xì)菌可保存1個(gè)月左右,酵母菌可保存3個(gè)月左右。如以橡皮塞代替棉塞,再用石蠟封口,置于4℃冰箱中保藏,不僅能防止水分揮發(fā)、能隔氧,而且能防止棉塞受潮而污染。這一改進(jìn)可使ATCC菌種的保藏期延長。
  該法的優(yōu)點(diǎn)是簡便易行,容易推廣,存活率高,故科研和生產(chǎn)上對(duì)經(jīng)常使用的ATCC菌種大多采用這種保藏方法。其缺點(diǎn)是菌株仍有一定程度的代謝活動(dòng)能力,保藏期短,傳代次數(shù)多,ATCC菌種較容易發(fā)生變異和被污染。
  2、石蠟油封藏法
  此法是在無菌條件下,將滅過菌并已蒸發(fā)掉水分的液體石蠟倒入培養(yǎng)成熟的ATCC菌種斜面(或半固體穿刺培養(yǎng)物)上,石蠟油層高出斜面頂端lcm,使培養(yǎng)物與空氣隔絕,加膠塞并用固體石蠟封口后,垂直放在室溫或4℃冰箱內(nèi)保藏。使用的液體石蠟要求無毒,化學(xué)純規(guī)格,其滅菌條件是:150~170℃烘箱內(nèi)滅菌lh;或121℃高壓蒸汽滅菌60~80min,再置于80℃的烘箱內(nèi)烘干除去水分。
  ATCC菌種由于液體石蠟阻隔了空氣,使菌體處于缺氧狀態(tài)下,而且又防止了水分揮發(fā),使培養(yǎng)物不會(huì)干裂,因而能使保藏期達(dá)1~2年,或更長。這種方法操作簡單,ATCC菌種適于保藏霉菌、酵母菌、放線菌、好氧性細(xì)菌等,對(duì)霉菌和酵母菌的保藏效果較好,可保存幾年,甚至長達(dá)10年。但對(duì)很多厭氧性細(xì)菌的保藏效果較差,尤其不適用于某些能分解烴類的ATCC菌種。
  3、砂土管保藏法
  這是一種常用的長期保藏ATCC菌種的方法,適用于產(chǎn)孢子的放線菌、霉菌及形成芽孢的細(xì)菌,對(duì)于一些對(duì)干燥敏感的細(xì)菌如奈氏球菌、弧菌和假單胞桿菌及酵母則不適用。
  ATCC菌種制作方法是,先將砂與土分別洗凈、烘干、過篩(一般砂用60目篩,土用120目篩),按砂與土的比例為(1~2):1混勻,分裝于小試管中,砂土的高度約1cm,以121℃蒸汽滅菌1~1.5h,間歇滅菌3次。50℃烘干后經(jīng)檢查無誤后備用。也有只用砂或土作載體進(jìn)行保藏的。ATCC菌種需要保藏的菌株先用斜面培養(yǎng)基充分培養(yǎng),再以無菌水制成108~1010個(gè)/ml菌懸液或孢子懸液滴入砂土管中,放線菌和霉菌也可直接刮下孢子與載體混勻,而后置于干燥器中抽真空約2~4h,用火焰熔封管口(或用石蠟封口),置于干燥器中,在室溫或4℃冰箱內(nèi)保藏,后者效果更好。
 
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